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    Pannarase耐高鹽全能核酸酶

    Pannarase耐高鹽全能核酸酶是一種非特異性核酸內切酶,該酶產品是從大腸桿菌菌株BL21中表達純化得到。該蛋白酶是由149個氨基酸構成的單鏈多肽,分子量為16.8 kDa,Ca2+Mg2+可以穩定其構象。該酶可以將任何形式的DNARNA(線性、環形、超螺旋)降解成3’-單核苷酸及二核苷酸,并可在一系列寬泛的操作條件下保持高效性。本產品可用于鹽濃度較高、偏堿性的病毒下游純化。

    產品信息
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    Q&A
    應用文獻

    產品性質:

    項目

    描述

    規格

    10/50/500U/

    分子量

    16kDa

    純度

    ≥99% ?(SEC-HPLC)

    比活性

    ≥2x106 U/mg

    最適pH

    8.5-10

    最適溫度

    37°C

    輔助因子

    0.55-5 mM Mg2+;0.5-10 mM Ca2+

    儲存溫度

    -20°C,避免反復凍融

    (由于甘油的存在,-20°C條件下不會凍?。?/span>

    活力單位:通過測定其裂解鯡魚精DNA底物的能力(herring Sperm DNA, Sigma,目錄號D7290)一個單位Pannarase全能核酸酶活力定義為在37°C pH8.0反應條件下30分鐘內導致A260值降低1.0(相當于完全消化37μg DNA)。


    產品特點:

    • 杰出單位比酶活
    • His標簽純化
    • 質譜均一性認證
    • 無動物源(AOF
    • 耐鹽、耐堿性條件


    SDS-PAGE鑒定

    非還原及還原的SDS-PAGE顯示蛋白分子量約16kDa,未見雜蛋白。


    SEC-HPLC純度測定


    尺寸排阻色譜顯示高純度,無聚集體產生。


    應用案例:

    1. Na+離子對Pannarase酶活性的影響

    Pannarase在中等Na+濃度條件下活性較高,300 mM時仍有36.2%的活性,但濃度超過600mM時酶活性基本完全喪失。


    2. Mg2+離子對Pannarase酶活的影響

    1 mM Mg2+可以提升Pannarase內切酶40%左右的活性,但Mg2+并不是必須的


    3. Ca2+離子對Pannarase酶活的影響

    1 mM Ca2+可以提升Pannarase內切酶28%的活性,但Ca2+并不是必須的


    4. 不同pH條件下Pannarase酶活性比較

    Pannarase酶活性最適pHpH8.0 - 11.0


    運輸和保存方法:干冰運輸。-15℃ ~ -25℃保存,有效期2年。


    推薦使用條件:

    條件

    最適條件*

    有效條件#

    Mg2+

    0.55-5 mM

    0-10 mM

    Ca2+

    0.5-10 mM

    0-10 mM

    pH

    8.5-10

    7.0-11.0

    Na+

    0-150 mM

    0- 500 mM

    *“最適條件指的是在此條件下Pannarase核酸酶可保持>90%的活性

    **“有效條件指的是在此條件下Pannarase核酸酶可保持>15%的活性

    注:具體參數可參見Pannarase 產品性能部分


    使用方法:

    1.對于大腸桿菌破碎液

    為了達到降低粘度的目的,加入核酸酶的用量須根據破碎液的菌體濃度來決定,如果菌體濃度在50%,建議加入的核酸酶的量為11000-51000,即50-250U/L。如果菌體濃度在5%,則可以按照110000-510000的比例加入。

    2.對于細胞裂解液

    可以按照106-107個細胞加入500單位核酸酶。

    3.對于純化后的腺病毒或者病毒疫苗

    由于DNA含量相對較少,可以按照萬分之一到萬分之五也就是每毫升5個單位的最終濃度加入。


    注意事項:

    1.酶的最佳作用條件為pH 8.0–11.0,37°C,30min。

    2.酶活性比較穩定,室溫放置短期內不會有太大影響,長時間保存需放置在-20°C冰箱內。酶用不含甘油緩沖液稀釋后盡快使用,不推薦凍存后再使用。

    3.對于僅為降低粘度為目的,可以直接加入核酸酶,室溫緩慢攪拌30 min。


    訂購信息:

    產品貨號

    產品名稱

    級別

    產品規格

    CY006F0010

    Pannarase耐高鹽全能核酸酶

    科研級

    100 kU

    CYG006F0010

    Pannarase耐高鹽全能核酸酶

    GMP級

    100 kU

    CYG006F0050

    Pannarase耐高鹽全能核酸酶

    GMP級

    500 kU

    CYG006F0500

    Pannarase耐高鹽全能核酸酶

    GMP級

    5000 kU


    Q:使用后如何滅活或去除耐高鹽全能核酸酶?

    A:由于SAN的等電點很高(9.6),可以很容易地用離子交換色譜法去除酶。熱滅活不是很有效。在70°C時,SAN的半衰期約為2小時,但SAN易受還原劑的影響,這些還原劑如DTTTCEP可以增強酶的熱失活。加入螯合劑也會抑制SAN活性。


    Q:耐高鹽全能核酸酶是否可以用于病毒載體的純化,例如基于AAV的載體?

    A:是的,這種內切酶適合用于病毒載體的純化。病毒載體的純度在細胞或動物的體內轉導之前至關重要。鹽通常是通過最小化聚集和增加目標產量來實現高度純化載體的重要組成部分。SAN高質量與使用高鹽條件高度兼容。


    Q:與非鹽活性核酸酶相比,耐高鹽活性SAN的優點和缺點是什么?

    A:許多蛋白質緩沖液含有高濃度的鹽,以便從蛋白質中釋放DNA。與其他核酸酶相比,SAN在高鹽濃度下具有最佳活性。因為最優活動依賴于鹽,所以在待檢測樣品中鹽含量非常少的情況下,SAN的活性可能不高。


    Q:SAN 在含有0.1% Triton® X-100的溶液中具有活性嗎?

    A:是的。不過活性會降低至正?;钚缘?/span>70%。在0.5% Triton® 中,將幾乎沒有活性。


    Q:SAN在含有10%甘油的緩沖液中有活性嗎?

    A:有活性,但是活性降低了,約為與不含甘油樣品的80%活性。在50%的甘油溶液中,幾乎沒有活性。


    Q:可以用SAN替代Benzonase的所有應用場景嗎?

    A:在需要在高鹽緩沖液中作用的非特異性核酸酶的應用中,SAN可以代替Benzonase。


    Q:如何較為直觀的判斷SAN是否發揮作用?

    A:隨著SAN降解DNARNA,細胞裂解液在視覺上變得不那么粘稠。任何核酸檢測方法都可以用于檢測核酸的消化效果。


    Q:SAN 的最低反應溫度是多少?

    A:最佳反應溫度為37℃。SAN在低溫下也很活躍,但反應會慢一些。4℃時的活性約為37℃時活性的5-10%。這可以通過增加反應時間或在反應中使用的酶的量來補償。

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