D-螢光素是螢光素酶的常用底物，在Mg2+、ATP存在條件下與螢光素酶發生反應，生成二氧雜環丁烷結構，并產生發光現象。在螢光素過量條件下，產生的光子數與酶的濃度呈正相關性。這類發光反應可用于啟動子優化，藥物篩選，細胞ATP水平分析等實驗。
D-螢光素鉀鹽擁有較好的水溶性和脂溶性，相較于D-螢光素（游離酸）能更好應用于體外活細胞和體內活體生物發光成像等研究。
產品性質：
產品別名 | D-螢光素鉀鹽； 5-氟-螢光素 |
CAS號 | 115144-35-9 |
分子式 | C11H7N2KO3S2 |
分子量 | 318.4 |
外觀 | 淡黃色粉末 |
溶解性 | 易溶于水 |
純度（HPLC） | ≥99% |
產品用途：
報告基因分析
細胞體外生物發光分析
體內活體成象分析
高靈敏度ATP分析
其他螢光素酶及其基因相關的研究
貯存條件及效期：
-20℃避光干燥保存，有效期1年。冰袋運輸。
工作液現配現用，儲存液-20℃分裝儲存，避免反復凍融，在3個月內使用。
使用說明：
1.?體外生物發光分析
1）儲存液的制備
將1.0g D-螢光素鉀鹽溶解于33.3mL?無菌水中配制成30mg/mL的儲存液，或配制單次實驗所需的D-螢光素鉀鹽溶液。
2）體外活細胞生物發光檢測
a.?接種外源過表達螢火蟲螢光素酶的細胞在培養板上；
b.?將配制好的D-螢光素鉀鹽儲存液用細胞培養基稀釋成150μg/ml的工作液；
c.?移除細胞培養板中培養基，加入D-螢光素鉀鹽工作液于37°C孵育10min后用于細胞成像。
2. 體內活體成像分析
1）D-螢光素鉀鹽溶液制備
將1.0g D-螢光素鉀鹽在DPBS（w/o Ca2+,Mg2+）中溶解配制成15mg/mL，或配制單次實驗所需的D-螢光素鉀鹽溶液，使用0.2 μm濾膜過濾除菌。
2）體內活體生物發光的檢測
a.?以10μL/g體重確定注射量。每只小鼠接受150 mg?D-螢光素鉀鹽/kg體重（如對于體重為10 g的小鼠，需要注射100 μL以提供1.5 mg D-螢光素鉀鹽）；
b.?在活體成像前10-15min腹腔注射D-螢光素鉀鹽溶液，或根據動力學曲線確定具體時間。
3.?模型動物螢光素酶活性的動力學曲線
1)?將D-螢光素鉀鹽以15mg/ml溶解于DPBS（w/o Ca2+,Mg2+）中，腹腔注射，工作劑量為150mg /kg。
2)?等待3min，然后給動物進行常規麻醉(氣麻、針麻皆可)；
3)?將麻醉后的動物放置在成像室并拍攝第一張圖像。
4)?每5-10min連續拍照，持續40min，獲得模型動物的D-螢光素鉀鹽吸收動力學曲線。
5)?根據動力學曲線確定最佳成像時間。
注意事項：
1）最佳成像時間受注射方式、動物類型以及體重等的影響，因此建議每次實驗都要做螢光素酶動力學曲線，以確定最佳信號平臺期和最佳檢測時間。
2）如果要進行ATP相關檢測，盡量避免外源ATP的污染，如操作時戴手套并使用ATP-free的實驗耗材，在進行螢光素的溶解時應使用ATP-free無菌水。
3）本品需進行避光操作和保存。儲存液過濾除菌后可分裝于-20℃或-80℃凍存。如果有條件，可對儲存液充入氮氣或氬氣（防止氧化）。
4）在進行D-螢光素鉀鹽的溶解時，應使用無鈣鎂離子的DPBS，鈣鎂離子可能會抑制螢光素酶的活性，此外鎂離子可能會對螢光素的氧化造成影響，從而影響檢測。
5）本產品僅作科研用途！
訂購信息：
產品貨號 產品名稱 產品規格 CY057F0025 D-螢光素鉀鹽 25mg CY057F0100 D-螢光素鉀鹽 0.1g CY057F1000 D-螢光素鉀鹽 1 g
Q: D-螢光素鉀鹽的純度是多少？純度大小對實驗有影響嗎？
A: D-螢光素鉀鹽純度≥99 %，螢光素純度越高，相應污染物含量越低，相反則越高，污染物濃度過高將抑制某些酶和細胞中的生物學過程，可能會給實驗結果帶來偏差，并且可能會對實驗動物造成傷害。
Q: D-螢光素鉀鹽溶解度是多少？其溶液穩定嗎？
A: D-螢光素鉀鹽溶解度在40 mg/ml以上，其水溶液短期內存放于-80℃，對實驗效果沒有明顯影響。對于部分條件較敏感的實驗，為了控制實驗中的可變因素，推薦反應液新鮮配制。例如，熒光素酶過低、非最適的反應條件等都需要高質量的底物才能進行反應。
Q: D-螢光素鉀鹽的建議用量是多少？
A: 活體成像：以10 μL/g體重確定注射量。每只小鼠接受150 mg D-螢光素鉀鹽/kg體重（如對于體重為10 g的小鼠，需要注射100 μL以提供1.5 mg D-螢光素鉀鹽）。
體外成像：一般使用150μg/ml的工作液用于體外細胞成像。
Tips: 注射方式、動物類型以及體重等都會影響信號的發射，需要適當摸索，待螢光信號達到最強穩定平臺期，再用相應儀器進行成像分析。
Q: 配置好的D-螢光素鉀鹽溶液如何儲存？
A: 工作液現配現用，理想情況下，配置好的儲存液可于-20℃儲存較短時間。如有必要，螢光素溶液可在-20℃儲存長達3周。
Tips: 上述溶液在任何一種溫度長時間貯存下都有可能導致信號退化哦！
Q: 螢光素（酶）底物的形式有哪些？
A: 分為D-螢光素游離酸、D-螢光素鉀鹽和D-螢光素鈉鹽，由于水溶性高，因此鉀鹽和鈉鹽通常是最通用的兩種檢測底物，其中又以鉀鹽作為活體動物檢測使用的主要形式。
Q: 如何確定不同模型的峰值信號時間?
A: 生物發光信號的動力學具有組織依賴性。建議每5-10min對動物進行一次成像，最多40 min，為每個新模型創建一個動力學曲線。(常見信號峰值時間點在10-15 min左右，螢光反應發光一般在30 min后衰減，3 h后完全消失。)具體詳見逐典D-螢光素鉀鹽說明書“螢光素動力學曲線制備”。
Q: 螢光素底物可以透過血腦屏障嗎？
A: 螢光素底物約280 Da，螢光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細胞膜和血腦屏障。
Q: 螢光素酶的表達穩定性如何？
A: 螢光素酶基因能夠通過穩定篩選等過程插到細胞染色體內，當細胞進行分裂、轉移、分化從而進行持續穩定的表達，螢光素酶的半衰期約為3 h，故只有活細胞才能持續表達螢光素酶。
